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怎么用zen 统计激光扫描共聚焦 荧光亮度分布

激光扫描共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope，CLSM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。目前，激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域得到广泛应用。

组织和细胞中的定量荧光测定

激光扫描共聚焦显微镜可以从固定和荧光染色的标本以单波长、双波长或多波长模式，对单标记或多标记的细胞及组织标本的共聚焦荧光进行数据采集和定量分析,同时还可以利用沿纵轴上移动标本进行多个光学切片的叠加， 形成组织或细胞中荧光标记结构的总体图像,以显示荧光在形态结构上的精确定位。 常用于原位分子杂交、肿瘤细胞凋亡观察、单个活细胞水平的 DNA 损伤及修复等定量分析。

2. 细胞间通讯的研究

动物和植物细胞中缝隙连接介导的胞间通信在细胞增殖和分化中起着重要作用。 激光扫描共聚焦显微镜可通过观察细胞缝隙连接分子的转移来测量传递细胞调控信息的一些离子、小分子物质。 该技术可以用于研究胚胎发生、生殖发育、神经生物学、肿瘤发生等过程中缝隙连接通讯的基本机制和作用，也可用于鉴别对缝隙连接作用有潜在毒性的化学物质。

3. 细胞物理化学测定

激光扫描共聚焦显微镜可对细胞形状、周长、面积、平均荧光强度及细胞内颗粒数等参数进行自动测定。 能对细胞的溶酶体、线粒体、内质网、细胞骨架、结构性蛋白质、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞内特异结构的含量、组分及分布进行定量、定性、定时及定位测定。

4. 细胞内钙离子和 pH 值动态分析

激光扫描共聚焦显微镜技术是测量若干种离子浓度并显示其分布的有效工具，对焦点信息的有效辨别使在亚细胞水平显示离子分布成为可能。 利用荧光探针，激光扫描共聚焦显微镜可以测量单个细胞内 pH 和多种离子(Ca2+、K+、Na+、Mg2+)在活细胞内的浓度及变化。 一般来说，电生理记录装置加摄像技术检测细胞内离子量变化的速度相对较快,但其图像本身的价值较低,而激光扫描共聚焦显微镜可以提供更好的亚细胞结构中钙离子浓度动态变化的图像,这对于研究钙等离子细胞内动力学有意义。

4. 三维图像的重建

传统的显微镜只能形成二维图像，激光扫描共聚焦显微镜通过对同一样品不同层面的实时扫描成像，进行图像叠加可构成样品的三维结构图像。 它的优点是可以对样品的立体结构分析，能十分灵活、直观地进行形态学观察,并揭示亚细胞结构的空间关系。

5. 荧光漂白恢复技术

该方法的原理是一个细胞内的荧光分子被激光漂白或淬灭，失去发光能力，而邻近未被漂白细胞中的荧光分子可通过缝隙连接扩散到已被漂白的细胞中，荧光可逐渐恢复。 可通过观察已发生荧光漂白细胞其荧光恢复过程的变化量来分析细胞内蛋白质运输、受体在细胞膜上的流动和大分子组装等细胞生物学过程。

6. 长时程观察细胞迁移和生长

活细胞观察通常需要一定的加热装置及灌注室，以保持培养液的适宜温度及 CO2 浓度的恒定。 目前的激光扫描共聚焦显微镜，其光子产生效率已大大改善，与更亮的物镜和更小光毒性的染料结合后可以减小每次扫描时激光束对细胞的损伤,用于数小时的长时程定时扫描,记录细胞迁移和生长等细胞生物学现象。

7. 在细胞及分子生物学基础研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜应用照明针与检测孔共轭成像，有效抑制了焦外模糊成像并可对标本各层分别成像，对活细胞行无损伤的“光学切片”这种功能也被形象的称为“显微 CT”。CLSM 还可以对贴壁的单个细胞或细胞群的胞内、胞外荧光作定位、定性、定量及实时分析，并对胞内成分如线粒体、内质网、高尔基体、DNA、RNA、Ca2+、Mg2+、Na+ 等的分布、含量等进行测定及动态观察，使细胞结构和功能方面的研究达到分子水平。

8. 在肿瘤和物筛选研究中的应用

普通显微镜及电子显微镜，仅能对肿瘤相关抗原进行定性分析，而 CLSM 则可对单标记或者多标记细胞、组织标本及活细胞进行重复性极佳的荧光定量分析，从而对肿瘤细胞的抗原表达、细胞结构特征，抗肿瘤物的作用及机制等方面定量化。

9. 在血液病学和医学免疫学研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜观察免疫细胞和系统，如树突状细胞、单核-吞噬细胞系统、自然杀伤细胞、淋巴细胞时，在准确细胞定位的同时有效鉴定免疫细胞的性质。

10. 在大脑和神经科学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜分层扫描发现神经轴突的内部结构连续性好。用激光扫描共聚焦显微镜能观察到脑干组织中神经轴突的正常走向，可排除在荧光显微镜下由此造成的一些病理假象。并且激光扫描共聚焦显微镜能观察神经轴突的三维结构，因此应用 CLSM 有可能观察到普通光镜下未能发现的神经组织的细微病变。

11. 在眼科研究中的应用

利用激光扫描共聚焦显微镜可以观察晶状体，角膜、视网膜、虹膜和睫状体的结构和病理变化。

12. 在骨科研究领域中的应用

激光扫描共聚焦显微镜在骨科研究领域的应用现状表明，CLSM在观测骨细胞形态学研究、骨细胞特异性蛋白（骨钙素）以及骨细胞之间的相互作用具有显著的优势。

elasticsearch多实例怎么配置

1.1. 基本配置

elasticsearch的config文件夹里面有两个配置文 件：elasticsearch.yml和logging.yml，第一个是es的基本配置文件，第二个是日志配置文件，es也是使用log4j来记录日 志的，所以logging.yml里的设置按普通log4j配置文件来设置就行了。下面主要讲解下elasticsearch.yml这个文件中可配置的东西。

cluster.name: elasticsearch

配置es的集群名称，默认是elasticsearch，es会自动发现在同一网段下的es，如果在同一网段下有多个集群，就可以用这个属性来区分不同的集群。

node.name: "Franz Kafka"

节点名，默认随机指定一个name列表中名字，该列表在es的jar包中config文件夹里name.txt文件中，其中有很多作者添加的有趣名字。

node.master: true

指定该节点是否有资格被选举成为node，默认是true，es是默认集群中的第一台机器为master，如果这台机挂了就会重新选举master。

node.data: true

指定该节点是否存储索引数据，默认为true。

index.number_of_shards: 5

设置默认索引分片个数，默认为5片。

index.number_of_replicas: 1

设置默认索引副本个数，默认为1个副本。

path.conf: /path/to/conf

设置配置文件的存储路径，默认是es根目录下的config文件夹。

path.data: /path/to/data

设置索引数据的存储路径，默认是es根目录下的data文件夹，可以设置多个存储路径，用逗号隔开，例：

path.data: /path/to/data1,/path/to/data2

path.work: /path/to/work

设置临时文件的存储路径，默认是es根目录下的work文件夹。

path.logs: /path/to/logs

设置日志文件的存储路径，默认是es根目录下的logs文件夹

path.plugins: /path/to/plugins

设置插件的存放路径，默认是es根目录下的plugins文件夹

bootstrap.mlockall: true

设置为true来锁住内存。因为当jvm开始swapping时es的效率会降低，所以要保证它不swap，可以把ES_MIN_MEM和 ES_MAX_MEM两个环境变量设置成同一个值，并且保证机器有足够的内存分配给es。同时也要允许elasticsearch的进程可以锁住内存，linux下可以通过`ulimit -l unlimited`命令。

network.bind_host: 192.168.0.1

设置绑定的ip地址，可以是ipv4或ipv6的，默认为0.0.0.0。

network.publish_host: 192.168.0.1

设置其它节点和该节点交互的ip地址，如果不设置它会自动判断，值必须是个真实的ip地址。

network.host: 192.168.0.1

这个参数是用来同时设置bind_host和publish_host上面两个参数。

transport.tcp.port: 9300

设置节点间交互的tcp端口，默认是9300。

transport.tcp.compress: true

设置是否压缩tcp传输时的数据，默认为false，不压缩。

http.port: 9200

设置对外服务的http端口，默认为9200。

http.max_content_length: 100mb

设置内容的最大容量，默认100mb

http.enabled: false

是否使用http协议对外提供服务，默认为true，开启。

gateway.type: local

gateway的类型，默认为local即为本地文件系统，可以设置为本地文件系统，分布式文件系统，Hadoop的HDFS，和amazon的s3服务器。

gateway.recover_after_nodes: 1

设置集群中N个节点启动时进行数据恢复，默认为1。

gateway.recover_after_time: 5m

设置初始化数据恢复进程的超时时间，默认是5分钟。

gateway.expected_nodes: 2

设置这个集群中节点的数量，默认为2，一旦这N个节点启动，就会立即进行数据恢复。

cluster.routing.allocation.node_initial_primaries_recoveries: 4

初始化数据恢复时，并发恢复线程的个数，默认为4。

cluster.routing.allocation.node_concurrent_recoveries: 2

添加删除节点或负载均衡时并发恢复线程的个数，默认为4。

indices.recovery.max_size_per_sec: 0

设置数据恢复时限制的带宽，如入100mb，默认为0，即无限制。

indices.recovery.concurrent_streams: 5

设置这个参数来限制从其它分片恢复数据时最大同时打开并发流的个数，默认为5。

discovery.zen.minimum_master_nodes: 1

设置这个参数来保证集群中的节点可以知道其它N个有master资格的节点。默认为1，对于大的集群来说，可以设置大一点的值（2-4）

discovery.zen.ping.timeout: 3s

设置集群中自动发现其它节点时ping连接超时时间，默认为3秒，对于比较差的网络环境可以高点的值来防止自动发现时出错。

discovery.zen.ping.multicast.enabled: false

设置是否打开多播发现节点，默认是true。

discovery.zen.ping.unicast.hosts: ["host1", "host2:port", "host3[portX-portY]"]

设置集群中master节点的初始列表，可以通过这些节点来自动发现新加入集群的节点。

下面是一些查询时的慢日志参数设置

index.search.slowlog.level: TRACE

index.search.slowlog.threshold.query.warn: 10s

index.search.slowlog.threshold.query.info: 5s

index.search.slowlog.threshold.query.debug: 2s

index.search.slowlog.threshold.query.trace: 500ms

index.search.slowlog.threshold.fetch.warn: 1s

index.search.slowlog.threshold.fetch.info: 800ms

index.search.slowlog.threshold.fetch.debug:500ms

index.search.slowlog.threshold.fetch.trace: 200ms

1.2. 高级配置（线程池）

一个Elasticsearch节点会有多个线程池，但重要的是下面四个：

索引（index）：主要是索引数据和删除数据操作（默认是cached类型）

搜索（search）：主要是获取，统计和搜索操作（默认是cached类型）

批量操作（bulk）：主要是对索引的批量操作（默认是cached类型）

更新（refresh）：主要是更新操作（默认是cached类型）

可以通过给设置一个参数来改变线程池的类型（type），例如，把索引的线程池改成blocking类型：

min: 1

size: 30

wait_time: 30s

下面是三种可以设置的线程池的类型：

cache

cache线程池是一个无限大小的线程池，如果有很多请求的话都会创建很多线程，下面是个例子：

threadpool:

index:

type: cached

fixed

fixed线程池保持固定个数的线程来处理请求队列。

size参数设置线程的个数，默认设置是cpu核心数的5倍

queue_size可以控制待处理请求队列的大小。默认是设置为-1，意味着无限制。当一个请求到来但队列满了的时候，reject_policy参数可以控制它的行为。默认是abort，会使那个请求失败。设置成caller会使该请求在io线程中执行。

threadpool:

index:

type: fixed

size: 30

queue: 1000

reject_policy: caller

blocking

blocking线程池允许设置一个最小值（min，默认为1）和线程池大小（size，默认为cpu核心数的5倍）。它也有一个等待队列，队列的大小（queue_size ）默认是1000，当这队列满了的时候。它会根据定好的等待时间（wait_time，默认是60秒）来调用io线程，如果超时没有执行就会报错。

threadpool:

index:

type: blocking

min: 1

size: 30

wait_time: 30s

笔者在实际工作中，由于程序启动时即产生大量请求，导致队列大小溢出的情况，从而查询请求报错，可以在以下2个解决方法权衡处理：

1、增加队列长度，但随之带来的是CPU消耗高。

2、优化程序，适当控制程序的并发请求量。

1.3. 操作系统配置

1、文件句柄限制：ES在索引过程中，尤其是有很多分片和副本时，会创建若干文件。因此操作系统对打开文件数量的限制不能少于32000。对于linux服务器，通过可以在/etc/security/limits.conf中进行修改，并且可以用ulimit命令来查看当前值。

2、节点内存配置：ES每个节点默认的2014M内存空间可能是不够的。如果日志文件中有out of memory error错误，则应将环境变量ES_HEAP_SIZE设为大于1024的值。注意该值应超过总可用物理内存的50%，剩余内存可用作磁盘高速缓存，可大大提高搜索性能。

爱普生墨仓式打印机L358怎样实现无线连接？急呀

您好，您可以参照以下方法：

一.WIN 7/8系统时

您可参照爱普生网站提供的解决方案进行配置，详细解决方案请参见以下链接文档：;ArticleId=32550pg=view=columnid2=30574

二，

如果您所使用的无线路由器有WPS或QSS按键，请按一下WPS或QSS按钮，再按打印机面板上的WIFI按键3秒钟，左侧Wi-Fi指示灯开始红灯和绿灯交替闪烁，当红灯和绿灯常亮时打印机配置完成。

打印机配置完成后，请按照以下方法配置打印和扫描端口：

如果您还未安装打印机驱动，请插入随机光盘或登录以下爱普生网站下载L358驱动安装器：;ArticleId=32330，按照屏幕提示完成驱动安装及设置，当出现“连接类型”界面时请选择“+其他计算机”，按照屏幕提示操作将会自动配置打印机和扫描端口设置，配置完成后就可以实现Wi-Fi无线打印和扫描。

如果您已完成打印和扫描驱动的安装，按下i按键，先通过打印出网络状态页来确认打印机的IP地址。然后按照以下步骤设置打印和扫描端口：

电脑端设置打印端口：

1.将电脑正常接入无线网络（请确保与打印机的SSID相同）。

2.电脑左下角点击“开始”→“打印机和传真”或“设备和打印机”，鼠标右键点击所使用的打印机图标选择“打印机属性”-“端口”-“添加端口”-选择“Standard TCP/IPPort”，点击“新端口”，输入的打印机的IP地址，选择“下一步”，完成端口添加。

3.在“端口”中确认已选中设置好的无线网络接口，点击“应用”，无线网络打印设置完成。

电脑端设置扫描端口：

1.电脑左下角点击“开始”→“所有程序”→“EPSON” →“Epson Scan” →“Epson scan设置”。

2.打开Epson Scan设置后将“本地”修改成“网络”。

3.点击“添加”会自动搜索到一体机IP地址，用鼠标点击IP地址，再点击“确定” ，完成设置。

注：如果搜索不到一体机IP地址，点击“输入IP地址”，完成添加IP地址。